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科研細(xì)胞
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Pt K1細(xì)胞，長(zhǎng)鼻袋鼠腎細(xì)胞規(guī)格

產(chǎn)品名稱：Pt K1細(xì)胞，長(zhǎng)鼻袋鼠腎細(xì)胞規(guī)格

產(chǎn)品特點(diǎn)：Pt K1細(xì)胞，長(zhǎng)鼻袋鼠腎細(xì)胞規(guī)格上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品：G蛋白偶聯(lián)受體GPR158蛋白抗體英文名稱：GPR158 0.2ml

G1氨基丁酸A型受體相似蛋白2抗體英文名稱：GABARAPL2 0.2ml

接頭蛋白Gab 1抗體英文名稱：Gab1 0.1ml

磷酸化糖原合酶激酶3α抗體英文名稱：Phospho-GSK3 alpha （Ser21） 0.1ml

磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白4

產(chǎn)品型號(hào)：

更新日期：2021-03-16

訪問次數(shù)：689

Pt K1細(xì)胞，長(zhǎng)鼻袋鼠腎細(xì)胞規(guī)格的詳細(xì)資料：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

運(yùn)輸和保存：
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

產(chǎn)品名稱	Pt K1細(xì)胞，長(zhǎng)鼻袋鼠腎細(xì)胞規(guī)格
英文名稱	Pt K1 cells, kangaroo rat kidney cells
貨號(hào)	EY-X63328

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下，再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓脫落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

香; Coumarin CAS 91-64-5 規(guī)格：20mg 訂購|咨詢

巖大戟內(nèi)酯B CAS 37905-08-1 規(guī)格：HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

癌抗原19-9(CA19-9) CAS 規(guī)格：3支/套，0.5ml/支訂購|咨詢

CAS 規(guī)格：100mg 訂購|咨詢

4-甲氧基水楊酸;4-Methoxysa CAS 2237-36-7 規(guī)格：20mg 訂購|咨詢

知母皂苷Ａ1(94%) CAS 41059-79-4 規(guī)格：10mg 訂購|咨詢

牛磺 CAS 516-35-8 規(guī)格：20mg 訂購|咨詢

甘松新;Nardosine CAS 23720-80-1 規(guī)格：20mg 訂購|咨詢

;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證書 CAS 99675-03-3 規(guī)格：0.1g 訂購|咨詢

沒食子酸辛酯 CAS 1034-01-1 規(guī)格：HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

3,6,-二芥子酰基蔗糖 CAS 規(guī)格：20mg；98% 訂購|咨詢

Pt K1細(xì)胞，長(zhǎng)鼻袋鼠腎細(xì)胞規(guī)格GDNF家族受體α-1抗體英文名稱：GDNFRA 0.1ml

運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗體英文名稱：Gemin 2 0.1ml

葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體英文名稱：GLUT1 0.1ml

葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體英文名稱：GLUT2 0.1ml

磷酸化糖皮質(zhì)激素受體抗體英文名稱：Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser211) 0.1ml

γ連環(huán)蛋白/Catenin γ /γ鏈接素抗體英文名稱：Gamma catenin 0.2ml

G蛋白偶聯(lián)受體GPR158蛋白抗體英文名稱：GPR158 0.2ml

G1氨基丁酸A型受體相似蛋白2抗體英文名稱：GABARAPL2 0.2ml

接頭蛋白Gab 1抗體英文名稱：Gab1 0.1ml

磷酸化糖原合酶激酶3α抗體英文名稱：Phospho-GSK3 alpha (Ser21) 0.1ml

磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43抗體英文名稱：phospho-GAP43 (Ser41) 0.1ml

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